Q1：如何準備透析膜管？

透析膜管的準備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同。注意，我們不推薦煮沸處理，因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。
1、即用型 RC 膜，CE 膜可以用 DI 水沖洗 15-30 分鐘，去除防腐劑處理液。
2、Spectra/PorR7 標準級 RC 膜已經(jīng)預(yù)處理，去除了重金屬和硫化物，只需在去離子水中浸泡 15-30 分鐘，去除疊 dan 化鈉即可。
3、Spectra/PorR 1-6 標準級 RC 膜，一般情況下，在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑，而對于親和研究之類極其敏感的透析應(yīng)用或者重金屬及硫化物會影響透析樣品下游分析的應(yīng)用，可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過程中引入的痕量水平重金屬及硫化物。
 
Q2：透析的原理是什么？一般需要多長時間才能完成？
1、透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下，選擇性擴散通過半透膜，從而達到大 / 小分子分離，膜兩側(cè)濃度平衡，即小顆粒的溶質(zhì)通過膜，而大分子物質(zhì)不能通過，被截留在膜另一邊。
2、如果將樣品置于透析膜管內(nèi)，通過置換膜管外部的透析緩沖液，可將小顆粒物質(zhì)清除，從而達到純化大分子物質(zhì)的目的。一般來說，一天之內(nèi)置換 3-5 次緩沖液，然后在室溫條件下，放在攪拌臺上隔夜透析，即可達到的透析結(jié)果。標準的透析操作一般需要 16-24 小時。許多因素會影響透析效率，包括：擴散系數(shù)、pH 值、溫度、時間、物質(zhì)濃度、樣品體積、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù)、膜表面積、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率。
 
Q3：透析一個樣品需要多少體積的透析緩沖液？緩沖液置換頻率怎么安排？
透析緩沖液的體積越大，小分子擴散的驅(qū)動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為 100:1。當擴散速率降低，膜兩側(cè)溶液趨于平衡時，通過置換緩沖液，可維持小分子擴散驅(qū)動力和透析速率。我們一般推薦在 12-24 小時內(nèi)，置換緩沖液 2 到 3 次，具體安排如下：
1、一緩沖液置換：透析開始后 2-3 小時
2、二緩沖液置換：透析開始后 4-5 小時
3、后一次緩沖液置換：透析隔夜之前
 
Q4：如何選擇正確的截留分子量（MWCO）？
截留分子量應(yīng)該竟可能的大，以使透析速率更大化。但是，為了獲得大的樣品回收率，選擇的截留分子量應(yīng)至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半。對于需對幾種分子進行分離的應(yīng)用，分子之間的分子量差至少為 5 倍，才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求，可能需要使用其它的分離技術(shù)，如色譜方法或切向流過濾。
 
Q5：哪種膜的蛋白質(zhì)結(jié)合率低？
每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球狀蛋白，相對的結(jié)合親和性由低到高為 CE< RC。

Q6：怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾？
1、標準 RC 膜（Spectra/Por 1-7）和生物技術(shù)級 RC 膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造，可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術(shù)級 CE & PVDF 膜由相對剛性的聚合物制造，需要使用相對溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用，如不確定選擇哪種膜夾合適，使用通用膜夾即可。標準膜夾一般只用于標準級RC 膜管。
2、膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長 4-10 mm。通用膜夾的小密封寬度為 50 mm。對于所有扁平寬度規(guī)格的膜管，均有相應(yīng)的膜夾可供選擇。